New insights into the biology, ecology and control of black-foot disease in grapevine stars

Resumen

Actualmente, las enfermedades fúngicas de la madera de la vid son muy graves y han sido señaladas en muchos foros como una de las principales preocupaciones actuales del sector vitivinícola, si no la mayor. Entre estas enfermedades destaca la enfermedad del pie negro, cuya incidencia es creciente en viveros de vid y en nuevas plantaciones. Esta enfermedad está causada por numerosas especies con formas asexuales del tipo “Cylindrocarpon”. El pie negro ha sido extensamente estudiado en España durante los últimos años. Sin embargo, la constante reclasificación y ampliación taxonómica de las especies asociadas a la enfermedad, la restricción en la aplicación de fungicidas y la emergencia en el uso de técnicas de secuenciación de nueva generación ha hecho necesario una revisión y actualización de los conocimientos obtenidos hasta ahora. En esta tesis se ha estudiado en detalle la biología y ecología de la enfermedad, y se han evaluado diversas estrategias de control. En primer lugar, se han caracterizado una amplia colección de aislados asociados al pie negro obtenidos de vides asintomáticas. Estos aislados fueron analizados mediante el estudio de sus caracteres fenotípicos y la secuenciación de los genes his3, tef1 y tub2 y la región ITS. Como resultado, se describieron dos nuevas especies asociadas al pie negro de la vid: Dactylonectria riojana e Ilyonectria vivaria, y por primera vez se han aislado de vid Ilyonectria pseudodestructans y Neonectria quercicola, elevando a 17 el total de especies fúngicas asociadas con la enfermedad en España. Además, se ha desarrollado un medio semi-selectivo, basado en un trabajo ya publicado, para identificar y cuantificar propágulos viables de hongos asociados al pie negro en muestras de suelo. El uso de este medio ha permitido confirmar la presencia de inóculo en campos de vivero en rotación y en viñedos adultos. Además, se ha establecido una relación positiva entre Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de los patógenos de la enfermedad del pie negro y la concentración de CaCO3 en el suelo. A continuación, se ha caracterizado el microbioma fúngico y bacteriano de la rizosfera de 5 portainjertos en dos viñedos localizados en La Rioja y Navarra mediante secuenciación de amplicones. Los resultados mostraron que el genotipo es determinante en la selección del microbioma residente en la rizosfera en el viñedo adulto (25 años), mientras que este factor no influía en la selección del microbioma en el viñedo joven (7 años). Sin embargo, diversas especies bacterianas y fúngicas se encontraron en ambos viñedos, lo que demuestra la existencia de un microbioma conservado en el viñedo, independientemente de la región geográfica. Además, se ha observado una correlación positiva entre la abundancia relativa de patógenos de la enfermedad del pie negro obtenida mediante secuenciación masiva de amplicones y la obtenida mediante qPCR. También se ha comprobado que la rizosfera de los portainjertos “140 R” y “161-49 C” contiene menor cantidad de estos patógenos que los portainjertos “1103 P”, “110 R” y “41 B”. Por último, en cuanto a medidas de control, se ha comparado la eficacia de la biofumigación con mostaza blanca con el empleo de propamocarb + fosetyl-Al, así como el efecto de la aplicación de Tusal®, un producto comercial basado en las especies Trichoderma atroviride T11 y Trichoderma asperellum T25. Se ha confirmado que la biofumigación con Brassica sp. es una alternativa prometedora al uso de fungicidas químicos para el control de la enfermedad del pie negro, mientras que la aplicación de Trichoderma spp. sobre las raíces antes de la plantación resultó ser inefectiva para el manejo de la enfermedad.