Análisis funcional y de expresión de la enterocina as-48 en enterococcus faecalis y transferencia a otras bacterias del ácido láctico

Résumé

La enterocina AS-48 es un péptido circular producido por enterococcus faecalis, que muestra un amplio espectro de acción frente a numerosas bacterias patógenas transmitidas por alimentos y alterantes de los mismos. En esta Memoria se ha completado la caracterización de la región genética responsable del carácter AS-48 clonada en pAM401, que consta de los genes as-48ABCC1DD1EFGH, en la que as-48A es el gen estructural. La caracterización de los productos codificados por los cuatro últimos genes, obtenidamediante análisis fenotípico de los mutantes de inserción con el transposoón Tn5 y la aplicación de programas informáticos de alta fiabilidad, ha permitido conocer que los genes as-48EFGH codifican un transportador de tipo-ABC implicado en al autoprotección frente a AS-48. En este sistema de transporte se ha identificado la función de As-48G, en la que se encuentran los dominios de unión a ATP y la de las proteínas As-48EH que presentan cuatro dominios de expansión en membrana, mientras la proteína As-48F podría aumentar la eficacia del transportador. El análisis de transcripción de la región as-48 realizado mediante Northern Blot, junto a los resultados derivados de los estudios de complementación en trans de los genes as-48ABC en pAM36e llevados a cabo, ha permitido concluir que la región as-48 se encuentra estructurada en dos operones de expresión constitutiva (as-48ABC y as-48C1DD1EFGH) aunque presentan promotores internos que permiten la expresión regulada de los genes as-48BC y as-48EFGH. La región as-48 ha sido clonada en vectores propios bacterias del ácidoláctico (plL253-81 y pEM76-81), pero ninguna de las nuevas construcciones obtenidas ha igualado la eficacia de pAM401-81 en la expresión y resistencia frente a AS-48. La transferencia de la región as-48 a cepas de interés biotecnológico, ha sido realizada con éxito en Lactococcus, Lactobacillus y E.faecium. Las dos primeras sólo mostraron una débil expresión de la re