Estudio sobre enzimas amilolíticas de las levaduras no convencionales Phaffia rhodozyma y Scgwanniomyces occidentalis

Resum

En este trabajo se ha obtenido una cepa industrial de Saccharomyces cerevisiae panadera con capacidad amilolítica por inclusión en su genoma del gen SWA 2 de Schwanniomyces occidentales. La nueva cepa contiene DNA exclusivamente de levaduras y presenta un alto nivel de aprovechamiento de almidón. La transformación de las levaduras se llevó a cabo mediante un proceso de integración genómica dirigido allocus ILV2. El gen SWA 2 se expresa de manera constitutiva bajo el promotor ADH 1. Se ha estudiado el crecimiento, aprovechamiento de almidón y capacidad fermentativa de la nueva cepa obtenida. Las pruebas de panaderia realizadas, revelaron que no se producen mejoras significativas al utilizar la cepa transformada de S. cerevisiae. Nos planteamos, por tanto, la coexpresión de la -amilasa SWA 2 con otro tipo de actividades amilolíticas. Para ello, se estudió el sistema amilolítico de la levadura Phaffia rhodozyma, como posible donador de actividades amilolíticas. La levadura Phaffia rhodozyma ha sido ampliamente utilizada en la industria alimentaria ya que produce el pigmento astaxantina. En este trabajo, se estudia el crecimiento de la levadura sobre distintos sustratos y se analiza su sistema amilolítico. Se ha purificado una -glucosidasa extracelular de esta levadura utilizando cromatografía de intercambio iónico. El peso molecular de la proteína purificada es de 115+ - 7% según las pruebas de filtración molecular en condiciones no desnaturalizantes. Los geles SDS-PAGE determinan que la proteína está compuesta de dos subunidades de aproximadamente 60 kDa cada una. Las condiciones de máxima actividad son 45°C y pH 5,5. La enzima presenta una alta actividad sobre maltosa, maltotriosa y oligosacáridos y no hidrolizalos sustratos que estan formados por enlaces a (1,6). La nueva -glucosidasa presenta actividad transglicosidasa y puede ser utilizada para la sintesis de oligosacáridos con capacidad prebiót