Análisis de organismos modificados genéticamente en alimentos mediante el uso combinado de reacción en cadena de la polimerasa y electroforesis capilar

Resumen

En esta tesis se ha estudiado la aplicación de la electroforesis capilar en geles (CGE) al análisis de secuencias de DNA específicas amplificadas por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para llevar a cabo la detección de organismos modificados genéticamente (OMGs) en alimentos. Para llevar a cabo este estudio se han desarrollado tres procedimientos de análisis novedosos que permiten la detección sensible, la cuantificación y la detección múltiple de OMGs en alimentos. La primera parte de la memoria recoge la metodología empleada en el desarrollo de un método sensible para la detección de maíz transgénico Bt Event 176 en harina de maíz. El método se basa en la amplificación de secuencias de DNA transgénicas y DNA genómico de maíz por PCR a partir de extractos purificados de maíz, y en su posterior análisis mediante CGE y detección de fluorescencia inducida por láser (LIF). La utilización de CGE-LIF para llevar a cabo el análisis de los productos de PCR proporciona una elevada sensibilidad y eficacia, elementos que son de vital importancia en la discriminación de falsos negativos y positivos. Además, demuestra una exactitud aceptable en el cálculo del tamaño de los fragmentos de DNA estudiados y una reproducibilidad buena, de modo que el método puede ser aplicado con confianza para la detección de maíz transgénico a niveles inferiores a los que ha fijado la normativa europea para el etiquetado distintivo obligatorio de los alimentos que contienen, consisten o son producidos a partir de OMGs (en la actualidad es 0.9% OMG). La segunda parte de la memoria detalla el diseño y puesta a punto de un procedimiento analítico para la determinación cuantitativa de maíz transgénico Bt Event 176 en alimentos. Dicho procedimiento consiste en el empleo de sistemas de amplificación competitiva mediante QC-PCR (Quantitative Competitive PCR) y el análisis de los productos de PCR mediante CGE-LIF. La