Caracterización del sistema sensorial de dos componentes de Staphylococcus aureus

Resumen

En este trabajo de tesis hemos evaluado dos aproximaciones diferentes dedicadas a la búsqueda de fármacos que tengan como diana de acción los TCSs. Por un lado, dentro del proyecto 'Nuevas estrategias para el control de infecciones nosocomiales (RTC-2015-3184-1) hemos participado en la evaluación de una colección de fármacos aprobados por la FDA (colección Prestwick) para distintas patologías como posibles agentes antimicrobianos frente a S. aureus. El objetivo era reconvertir alguno de estos fármacos (repurposing) y que además de utilizarse para la finalidad para la que fue descrito, también actuara como antimicrobiano. En el caso concreto de nuestro estudio, el escrutinio se hizo frente al TCS GraRS. La segunda estrategia, recogida en el cuarto capítulo de esta tesis, ha consistido en el desarrollo de dos terapias alternativas frente a S. aureus basadas en inmunoterapias: anticuerpos monoclonales y nanoanticuerpos. Para ello, hemos elegido como diana de acción la HK del TCS esencial WalKR, en particular los anticuerpos se han generado frente al dominio de unión a ligando (ligand-bindig domain, LBD) de la HK. La elección de esta diana se debe a dos razones, por un lado, se trata del único TCS esencial de S. aureus y, por otro lado, ensayos realizados con sueros de pacientes infectados por S. aureus mostraron la presencia de anticuerpos frente a este dominio. A lo largo de la tesis hemos producido anticuerpos monoclonales y nanoanticuerpos frente a diferentes epítopos del LBD. Hemos realizado diferentes ensayos para probar el reconocimiento de la proteína tanto in vitro como in vivo y para analizar el efecto de los anticuerpos en el crecimiento de S. aureus. Los ensayos preliminares indican que varios de los nanoanticuerpos desarrollados activan el crecimiento de la bacteria en lugar de reducir su crecimiento. Este resultado, aunque inesperado, indica que es posible desarrollar nanoanticuerpos capaces de afectar la funcionalidad de la HK y por tanto de bloquear su actividad.