Respuesta de los frutos cítricos a las bajas temperaturasestudio mediante micromatrices

Resumo

En esta Tesis Doctoral se ha abordado el estudio de la respuesta al frío en el flavedo de frutos cítricos. Los frutos cítricos deben someterse a bajas temperaturas durante los tratamientos cuarentenarios requeridos para evitar la propagación de plagas con la exportación. Desafortunadamente, los frutos de variedades sensibles desarrollan síntomas de daño por frío durante este tratamiento, fundamentalmente en el flavedo (parte externa coloreada de la piel). En este trabajo se utilizaron frutos de Clementina de Nules (CN), variedad tolerante, y de Clementina Fortune (F), sensible, para analizar a nivel transcriptómico las respuestas de adaptación y de desarrollo de daños durante la exposición al frío. Para ello (1) se generaron dos genotecas de cDNA (una de longitud completa) representativas de flavedo de frutos CN sometidos a estrés por frío; (2) los cDNAs novedosos obtenidos se incluyeron junto con otros para generar la micromatriz del Proyecto de Genómica de Cítricos (CFGP1) para el análisis transcriptómico; y (3) utilizando esa micromatriz, se analizaron los cambios que ocurren en el transcriptoma de los flavedos de CN y F a lo largo de una serie temporal de almacenamiento a 2ºC. Las genotecas de frío mostraron un considerable porcentaje de novedad, entre el que se identificaron genes potencialmente específicos de la respuesta a las bajas temperaturas. La micromatiz CFGP1 contiene cDNAs de 12672 ESTs, correspondientes a 6875 unigenes, de los cuales 10.3% ESTs proceden de las genotecas de frío. El análisis transcriptómico puso de manifiesto que la tendencia general de la respuesta frente a la exposición al frío fue similar en CN y en F durante las cuatro primeras semanas de exposición. En ambas variedades se produjo una represión de procesos biosintéticos, principalmente de proteínas y también de lípidos, y se activó su catabolismo. Sin embargo, también se indujo la expresión de otro grupo de genes relacionados con la síntesis de proteínas, lo que sugiere un reajuste en las funciones celulares a nivel de la traducción. Pese a la similitud, en CN se observaron cambios más intensos durante la primera semana que luego cesaron, mientras que en F los cambios fueron más progresivos. La comparación transcripcional sí reveló diferencias notables entre los flavedos de CN y F previamente a su exposición al frío. Algunas de estas diferencias podrían ser causantes, al menos en parte, de la tolerancia de CN, al igual que el citado retraso de la respuesta al frío en F. Por último, también se detectó un programa de expresión tardío exclusivo de F, que podría relacionarse con el desarrollo de daños.